เปรียบเทียบแนวทางฉบับใหม่และฉบับเดิมสำหรับการทดสอบความเป็นพิษเฉียบพลันต่อไส้เดือนดิน

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ไม่ใช้กับสารเคมีกำจัดศัตรูพืชที่ระเหยง่ายและละลายได้น้อย

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ไม่ใช้กับสารกำจัดศัตรูพืชที่ระเหยง่าย ยกเลิกข้อจำกัดเรื่อง “ละลายได้น้อย” จึงขยายชนิดสารที่สามารถทดสอบได้

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ไม่มี

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): เพิ่มบทที่ 2 สำหรับเอกสารอ้างอิงเชิงบรรทัดฐานโดยเฉพาะ อ้างถึงมาตรฐานสนับสนุนสำคัญ ได้แก่ GB/T 6682 (น้ำสำหรับห้องปฏิบัติการวิเคราะห์), NY/T 52 (การวิเคราะห์ดิน), NY/T 1121.2 (การวัด pH ของดิน) และ NY/T 4195.8 (การเพาะเลี้ยงสิ่งมีชีวิตสำหรับทดสอบ)

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ให้คำจำกัดความของปลอกสืบพันธุ์ ไส้เดือนดินตัวเต็มวัย ความเข้มข้นที่ทำให้ตายกึ่งหนึ่ง สารทดสอบ และสารเคมีกำจัดศัตรูพืช

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ลบคำจำกัดความของปลอกสืบพันธุ์ ไส้เดือนดินตัวเต็มวัย สารทดสอบ และสารเคมีกำจัดศัตรูพืช โดยคงไว้เฉพาะศัพท์หลัก คือ ความเข้มข้นที่ทำให้ตายกึ่งหนึ่ง (LC50).

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): อุณหภูมิ: 20°C ± 2°C; ความชื้นสัมพัทธ์ของอากาศ: 70% ถึง 90%; ความเข้มแสง: 400 lx ถึง 800 lx

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ยกเลิกข้อกำหนดความชื้นสัมพัทธ์ของอากาศขณะทดสอบเพื่อเพิ่มความยืดหยุ่นในการดำเนินงาน อุณหภูมิยังคงเป็น 20°C ± 2°C และความเข้มแสงยังคงเป็น 400 lx ถึง 800 lx

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ไม่มี

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): เพิ่มรายการสารเคมีอย่างละเอียด เช่น acetone, n-hexane, ทรายควอตซ์ ดินขาว แคลเซียมคาร์บอเนต และ chloroacetamide เพื่อระบุสารเคมีและวัสดุที่จำเป็นอย่างชัดเจน

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): แนะนำให้เลือกตัวเต็มวัยของ ไส้เดือนดินชนิด Eisenia fetida สำหรับทดสอบ โดยมีน้ำหนักตัวระหว่าง 0.30 g ถึง 0.60 g

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): กำหนดให้ใช้ ไส้เดือนดินชนิด Eisenia fetidaโดยต้องเป็นไส้เดือนดินตัวเต็มวัยที่แข็งแรง อายุเกิน 2 เดือน มีปลอกสืบพันธุ์พัฒนาแล้ว (สมบูรณ์เพศ) และมีน้ำหนักตัวระหว่าง 300 mg ถึง 600 mg การเพาะเลี้ยง ไส้เดือนดินชนิด Eisenia fetida ต้องเป็นไปตาม NY/T 4195.8 เพื่อให้สภาวะการเลี้ยงเป็นมาตรฐานเดียวกัน

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ระบุเฉพาะอุปกรณ์หลัก ได้แก่ ตู้บ่ม ภาชนะแก้ว และขวดวัดปริมาตร

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ให้รายการอุปกรณ์ครบถ้วนพร้อมข้อกำหนดความละเอียด ได้แก่ จานตกผลึกหรือบีกเกอร์ ตู้ควบคุมสภาพแวดล้อมหรือห้องอุณหภูมิคงที่ เครื่องผสม เครื่องชั่งอิเล็กทรอนิกส์ (ความละเอียดในการอ่าน: 0.01 g, 0.001 g, 0.0001 g) เครื่องชั่ง (ความละเอียดในการอ่าน: 0.1 g) เครื่องวัดหรือบันทึกอุณหภูมิและความชื้น เครื่องวัด pH เตาอบ และเครื่องวัดความเข้มแสง

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): สารทดสอบควรเป็นผลิตภัณฑ์สูตรผสม สารเกรดเทคนิค หรือสารบริสุทธิ์ สำหรับสารที่ละลายน้ำได้น้อย อาจใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ปริมาณเล็กน้อยที่มีความเป็นพิษต่ำต่อไส้เดือนดินเป็นตัวช่วย โดยทั่วไปไม่เกิน 0.1 mL(g)/L

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): สารทดสอบต้องเป็นสารเกรดเทคนิค (สารเข้มข้นเกรดเทคนิค) ผลิตภัณฑ์สูตรผสม หรือสารบริสุทธิ์ ก่อนทดสอบควรมีข้อมูลการละลายในน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์ ความคงตัวในน้ำและดิน ความคงตัวต่อการสลายด้วยแสง ความดันไออิ่มตัว ความบริสุทธิ์ ค่าสัมประสิทธิ์การแบ่งส่วน n-octanol/น้ำ และผลทดสอบการย่อยสลายทางชีวภาพได้ง่าย ซึ่งสะท้อนการให้ความสำคัญกับการระบุลักษณะสารก่อนทดสอบมากขึ้น

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ภายใต้สภาวะเดียวกับการทดสอบหลัก ให้กำหนดกลุ่มความเข้มข้นหลายระดับที่มีช่วงห่างกว้าง เพื่อหาความเข้มข้นต่ำสุดที่ทำให้ไส้เดือนดินตาย 100% และความเข้มข้นสูงสุดที่ทำให้ตาย 0% แล้วกำหนดความเข้มข้นของการทดสอบหลักภายในช่วงนี้

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): กำหนดกลุ่มทดสอบเป็นอนุกรมเรขาคณิต และทดสอบหาช่วงความเข้มข้นภายใต้สภาวะเดียวกับการทดสอบหลัก เพื่อกำหนดช่วงความเข้มข้นสำหรับการทดสอบหลัก การทดสอบหาช่วงไม่จำเป็นต้องทำซ้ำ จึงลดความซับซ้อนของขั้นตอนเบื้องต้น

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): กำหนดความเข้มข้นขีดจำกัดบนเป็น 100 mg a.i./kg ดินแห้ง (a.i. หมายถึงสารออกฤทธิ์) หากไม่พบไส้เดือนดินตาย ไม่ต้องทดสอบเพิ่มเติม

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): กำหนดความเข้มข้นขีดจำกัดบนเป็น 1,000 mg (หนึ่งพัน) ของสารทดสอบ/kg ดินแห้ง หากอัตราตายของไส้เดือนดินไม่เกิน 10% ไม่ต้องทำการทดสอบหลัก เกณฑ์ที่สูงขึ้นช่วยลดการทดสอบที่ไม่จำเป็นสำหรับสารที่มีความเป็นพิษต่ำ

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): กำหนดความเข้มข้น 5 ถึง 7 กลุ่มภายในช่วงที่ได้จากการทดสอบหาช่วง พร้อมกลุ่มควบคุมไม่ให้สาร 1 กลุ่ม หากใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ ต้องเพิ่มกลุ่มควบคุมตัวทำละลายด้วย แต่ละกลุ่มความเข้มข้นทำซ้ำ 3 ชุด

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): อ้างอิงผลทดสอบหาช่วงหรือข้อมูลความเป็นพิษที่ทราบ กำหนดความเข้มข้นทดสอบ 5 ถึง 7 ระดับเป็นอนุกรมเรขาคณิต พร้อมกลุ่มควบคุมไม่ให้สาร และกลุ่มควบคุมตัวทำละลายเมื่อมีการใช้ แต่ละกลุ่มต้องทำซ้ำ 4 ชุด (เพิ่มจาก 3) โดยใส่ไส้เดือนดิน 10 ตัวต่อชุด

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ไม่มี (ไม่ได้ระบุขั้นตอนเตรียมโดยเฉพาะ)

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ก่อนทดสอบ ต้องเลี้ยงไส้เดือนดินทดสอบในดินเทียมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ภายใต้สภาวะเดียวกับการทดสอบหลัก ล้างให้สะอาดและซับด้วยกระดาษกรองให้แห้งก่อนชั่งน้ำหนัก ขั้นตอนปรับตัวนี้ช่วยให้ผลทดสอบสม่ำเสมอขึ้น

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ใส่ดิน 500 g ในภาชนะแก้ว (ความลึกดิน ≥ 8 cm) เติมสารละลายทดสอบแล้วผสมให้ทั่ว หากใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ ต้องปล่อยให้ระเหยหมด ปรับความชื้นดินเป็น 30%–35% ของน้ำหนักดินแห้ง สำหรับสารที่ละลายน้ำได้น้อย อาจใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ปริมาณเล็กน้อย (≤ 0.1 mL(g)/L)

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): กำหนดวิธีให้สาร 3 วิธีตามการละลาย:

   (1) สำหรับ สารทดสอบที่ละลายน้ำได้: เตรียมสารละลายทดสอบด้วยน้ำ แล้วผสมกับดินเทียมให้ทั่ว
   (2) สำหรับ สารที่ละลายได้ในตัวทำละลายอินทรีย์: ละลายใน n-hexane หรือ acetone แล้วหยดลงบนทรายควอตซ์ 10 g เมื่อตัวทำละลายระเหยหมดแล้ว ผสมกับดินเทียมที่ทำให้ชื้นไว้ล่วงหน้า และเติมน้ำปราศจากไอออนจนได้น้ำหนักเปียก 750 g
   (3) สำหรับสารที่ ไม่ละลายในทั้งน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์:ผสมกับทรายควอตซ์ให้มีน้ำหนักรวม 10 g แล้วผสมกับดินเทียมที่ทำให้ชื้นไว้ล่วงหน้า และเติมน้ำปราศจากไอออนจนได้น้ำหนักเปียก 750 g

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ใส่ดิน 500 g ในภาชนะแก้ว (ความลึกดิน ≥ 8 cm)

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ใส่ดินเทียมที่ผ่านการให้สาร น้ำหนักเปียก 750 g ในภาชนะแก้ว โดยความลึกดินไม่น้อยกว่า 8 cm การระบุ “น้ำหนักเปียก” ใช้แทนการวัดที่อิงน้ำหนักแห้งเดิม

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ชั่งครั้งเดียวเมื่อเริ่มทดสอบ น้ำหนักตัวระหว่าง 0.30 g ถึง 0.60 g

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ชั่ง 2 ครั้ง คือ เมื่อเริ่มทดสอบ (น้ำหนักตัวระหว่าง 0.30 g ถึง 0.60 g) และชั่งไส้เดือนดินที่รอดชีวิตเมื่อสิ้นสุดการทดสอบ 

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): เติมน้ำปราศจากไอออนเพื่อปรับความชื้นดินเป็น 30%–35% ของน้ำหนักดินแห้ง

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): หากจำเป็น ให้เติมน้ำเพื่อปรับความชื้นดินเป็นประมาณ 35% ของน้ำหนักดินแห้ง ต้องวัดปริมาณความชื้นดินตาม NY/T 52 เพื่อให้ใช้วิธีวัดที่เป็นมาตรฐาน

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ทดสอบเป็นเวลา 2 สัปดาห์ ในวันที่ 7 และ 14 ให้เทดินออก สังเกตและบันทึกอาการเป็นพิษกับไส้เดือนดินที่ตาย (ใช้เข็มแตะส่วนท้าย หากไม่ตอบสนองถือว่าตาย) นำตัวที่ตายออกทันที คำนวณ LC50 และขอบเขตความเชื่อมั่น 95% จากอัตราตายในวันที่ 7 และ 14

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ระยะทดสอบยังคงเป็น 14 วัน โดยปรับรายละเอียดสำคัญดังนี้:
   - ให้แสงอย่างต่อเนื่อง เพื่อให้ไส้เดือนดินอยู่ในดินเทียม
   - เติมน้ำเป็นระยะ โดยอาศัยการชั่งน้ำหนักเพื่อรักษาความชื้นดิน
   - วิธีสังเกตผล: ค่อย ๆ เทดินลงบนจานแก้วหรือถาด แล้วแยกไส้เดือนดินออกมาตรวจ
   - เกณฑ์การตาย: ถือว่าไส้เดือนดินตายเมื่อ ส่วนหน้า ไม่ตอบสนองต่อสิ่งเร้าเชิงกล (เปลี่ยนจากส่วนท้าย)
   - หลังตรวจในวันที่ 7 ให้นำไส้เดือนดินที่รอดชีวิตและดินเทียมกลับใส่ภาชนะเพื่อทดสอบต่อ
   - เมื่อสิ้นสุดการทดสอบ ให้ชั่ง ไส้เดือนดินที่รอดชีวิต และวัด ปริมาณความชื้น ของดินเทียม

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): อาจคำนวณ LC50 และขอบเขตความเชื่อมั่น 95% สำหรับแต่ละเวลาสังเกตด้วยวิธี Spearman-Kärber วิธีประมาณค่าเชิงเส้น หรือวิธีกราฟวิเคราะห์ probit และอาจใช้ซอฟต์แวร์คำนวณข้อมูลความเป็นพิษที่เหมาะสม

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): เลือกวิธีทางสถิติ เช่น probit หรือการถดถอย logistic เพื่อคำนวณ LC50 และช่วงความเชื่อมั่น 95% (ยกเว้นการทดสอบขีดจำกัด) อาจใช้ซอฟต์แวร์สถิติที่เหมาะสม เมื่อความเข้มข้น 2 ระดับที่อยู่ติดกัน มีอัตราส่วนเรขาคณิต ≤ 2.0 และให้อัตราตาย 0% กับ 100% ให้ใช้ค่าเฉลี่ยเรขาคณิตของความเข้มข้นทั้งสองเป็น LC50 แนวทางนี้ทำให้การวิเคราะห์ชัดเจนขึ้นและลดความกำกวมของกรณีขอบเขต

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): อัตราตายในกลุ่มควบคุมไม่ให้สารต้องไม่เกิน 10%

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): อัตราตายในกลุ่มควบคุมไม่ให้สารและกลุ่มควบคุมตัวทำละลายต้องไม่เกิน 10% การระบุกลุ่มควบคุมตัวทำละลายไว้ในเกณฑ์ควบคุมคุณภาพอย่างชัดเจนช่วยให้ติดตามผลกระทบจากตัวทำละลายได้อย่างเหมาะสม

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ข้อกำหนดพื้นฐานสำหรับการรายงาน

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): เนื้อหารายงานมีรายละเอียดและเป็นมาตรฐานมากขึ้น ครอบคลุมสภาวะทดสอบ ข้อมูลดิบ วิธีทางสถิติ และตัวชี้วัดคุณภาพเพิ่มเติม ซึ่งสอดคล้องกับแนวปฏิบัติ GLP ระหว่างประเทศและทำให้ข้อมูลโปร่งใสมากขึ้น

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ภาคผนวก A ระบุองค์ประกอบและสัดส่วนของดินเทียม

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): เพิ่มวิธีเตรียมดินเทียมนอกเหนือจากองค์ประกอบและสัดส่วน ทำให้มีขั้นตอนครบถ้วนเพื่อให้ห้องปฏิบัติการต่าง ๆ เตรียมดินได้สม่ำเสมอ

ฉบับเดิม (GB/T 31270.15-2014): ภาคผนวก B กำหนดความเป็นพิษ 4 ระดับตาม LC50 (14d) / (mg a.i./kg ดินแห้ง):

• เป็นพิษรุนแรงอย่างยิ่ง: LC50 ≤ 0.1

• เป็นพิษสูง: 0.1 < LC50 ≤ 1.0

• เป็นพิษปานกลาง: 1.0 < LC50 ≤ 10

• เป็นพิษเล็กน้อย: LC50 > 10

ฉบับใหม่ (GB/T 31270.15-2025): ลบภาคผนวกเรื่องการจัดระดับความเป็นพิษ