Toprak Solucanı Akut Toksisite Testi İçin Yeni ve Eski Kılavuzların Karşılaştırılması
Güncellenme tarihi
Pestisitlerin çevresel güvenlik değerlendirmesinin bilimsel titizliğini artırmak amacıyla, GB/T 31270.15-2025 «Kimyasal pestisitlerin çevresel güvenlik değerlendirmesine ilişkin test kılavuzları — Bölüm 15: Toprak solucanı akut toksisite testi» ulusal standardı resmen yayımlanmış ve önceki 2014 sürümünün yerini alarak 1 Mayıs 2026'da yürürlüğe girmiştir.
Bu revizyon test koşullarını, reaktif ve malzemeleri, veri işlemeyi ve kalite kontrolünü kapsamlı biçimde iyileştirir. Yeni sürüm, deney sırasındaki hava nemine ilişkin katı şartı kaldırarak esnekliği artırır. Ayrıca normatif atıflar bölümü ekler ve reaktiflerle ekipman listesini geliştirir.
REACH24H Hatırlatması
Şirketler, Çin'de pestisit ruhsatlandırması amacıyla gerçekleştirdikleri veya planladıkları toprak solucanı akut toksisite testlerinde artık 1 Mayıs 2026'da yürürlüğe giren GB/T 31270.15-2025'e uymalıdır. Eski 2014 yöntemine göre elde edilen veriler yeni düzenleyici başvurularda artık kabul edilmeyebilir.
1. Kapsam, Normatif Atıflar ve Tanımlar
2025 revizyonu standarda temel yapısal değişiklikler getirir: uygulama kapsamını genişletir, normatif atıflar ekler ve terim tanımlarını sadeleştirir. Bu değişiklikler tüm test işlemi için daha sağlam ve şeffaf bir çerçeve oluşturur.
1.1 Kapsam
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Uçucu ve az çözünen kimyasal pestisitlere uygulanmaz.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Uçucu pestisitlere uygulanmaz. “Az çözünen” kısıtlaması kaldırılarak test edilebilen maddelerin kapsamı genişletilmiştir.
1.2 Normatif Atıflar
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Yoktur.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Normatif atıflara özel Bölüm 2 eklenmiştir. Başlıca destekleyici standartlar GB/T 6682 (analitik laboratuvarlarda kullanılan su), NY/T 52 (toprak analizi), NY/T 1121.2 (toprak pH ölçümü) ve NY/T 4195.8 (test organizmalarının yetiştirilmesi) olarak belirtilir.
1.3 Terimler ve Tanımlar
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Klitelum, ergin toprak solucanı, medyan öldürücü konsantrasyon, test maddesi ve kimyasal pestisit tanımlarını içeriyordu.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Klitelum, ergin toprak solucanı, test maddesi ve kimyasal pestisit tanımları kaldırılmıştır. Yalnızca temel terim olan medyan öldürücü konsantrasyon korunmuştur (LC50).
2. Test Koşulları ve Malzemeler
2025 sürümü test için gerekli malzeme ve ekipman özelliklerini önemli ölçüde ayrıntılandırır; gereksiz kısıtlamaları kaldırırken laboratuvarlara daha açık uygulama rehberliği sağlar.
2.1 Test Koşulları
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Sıcaklık: 20°C ± 2°C; bağıl hava nemi: 70% ile 90%; ışık şiddeti: 400 lx ile 800 lx.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Deney sırasındaki hava nemi şartı kaldırılarak uygulama esnekliği artırılmıştır. Sıcaklık 20°C ± 2°C, ışık şiddeti ise 400 lx ile 800 lx olarak korunmuştur.
2.2 Reaktifler
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Yoktur.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Aseton, n-hexane, kuvars kumu, kaolin kili, kalsiyum karbonat ve kloroasetamid gibi maddeleri içeren ayrıntılı bir reaktif listesi eklenmiş, gerekli kimyasallar ve malzemeler açıkça belirtilmiştir.
2.3 Test Organizması
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Test için Eisenia fetida türü ergin toprak solucanlarının seçilmesi önerilir; vücut ağırlıkları 0.30 g ile 0.60 g arasında olmalıdır.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Belirtilen test organizması Eisenia fetida türü. Yaşı 2 ayı aşan, klitelumu gelişmiş (eşeysel olarak olgun), sağlıklı erginlerin vücut ağırlığı 300 mg ile 600 mg arasında olmalıdır. Bu Eisenia fetida türü için yetiştirme koşulları NY/T 4195.8'e uygun olmalıdır.
2.4 Cihazlar ve Ekipman
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Yalnızca başlıca cihazlar listelenmişti: inkübatör, cam kaplar ve balonjojeler.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Hassasiyet özellikleriyle birlikte kapsamlı bir ekipman listesi sunar: kristalizasyon kapları veya beherler, çevre koşulları odaları veya sabit sıcaklıklı odalar, karıştırma ya da harmanlama ekipmanı, elektronik teraziler (okunabilirlik: 0.01 g, 0.001 g, 0.0001 g), elektronik basküller (okunabilirlik: 0.1 g), termo-higrometre veya sıcaklık/nem kaydedicileri, pH metre, etüv ve lüksmetre.
2.5 Test Maddesi
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Test maddesi pestisit formülasyonları, teknik maddeler veya saf maddeler olmalıdır. Suda az çözünen maddeler için solucanlara düşük toksisite gösteren organik çözücüden az miktarda yardımcı çözücü olarak kullanılabilir; miktarı genellikle 0.1 mL(g)/L'yi aşmamalıdır.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Test maddesi teknik maddeler (teknik konsantreler), formülasyonlar veya saf maddeler olmalıdır. Test öncesinde maddenin su ve organik çözücülerdeki çözünürlüğü, su ve topraktaki kararlılığı, fotolize karşı kararlılığı, doymuş buhar basıncı, saflığı, n-oktanol/su dağılım katsayısı ve kolay biyobozunurluk test sonuçları edinilmelidir. Bu, test öncesi karakterizasyona çok daha fazla önem verildiğini gösterir.
3. Test İşlemleri
2025 standardındaki en kapsamlı değişiklikler test işlemlerindedir. Başlıca değişiklikler aralık belirleme testi, sınır testi ve kesin testin konsantrasyon belirleme ve tekrarlardan toprak hazırlama, organizmalarla çalışma ve gözlem protokollerine kadar hemen her aşamasını kapsar.
3.1 Aralık Belirleme Testi
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Kesin testle aynı koşullarda, aralarında geniş fark bulunan birkaç konsantrasyon grubu belirlenerek solucanlarda 100% ölüme neden olan en düşük ve 0% ölüme neden olan en yüksek konsantrasyon bulunur. Kesin test konsantrasyonları bu aralıkta belirlenir.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Uygulama grupları geometrik diziyle belirlenir. Kesin testin konsantrasyon aralığını bulmak için aralık belirleme testi kesin testle aynı koşullarda yürütülür. Aralık belirleme testinde tekrar gerekmez; böylece ön test aşaması sadeleşir.
3.2 Sınır Testi
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Üst sınır konsantrasyonu 100 mg a.i./kg kuru toprak olarak belirlenir (a.i., aktif maddeyi belirtir). Solucan ölümü gözlenmezse başka test gerekmez.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Üst sınır konsantrasyonu 1,000 mg (bin) test maddesi/kg kuru toprak olarak belirlenir. Solucan ölüm oranı 10%'u aşmazsa kesin test gerekmez. Daha yüksek eşik, düşük toksisiteli maddelerde gereksiz testleri azaltır.
3.3 Kesin Test — Konsantrasyon Belirleme ve Tekrarlar
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Aralık belirleme testinin saptadığı aralıkta 5 ile 7 konsantrasyon grubu ve bir işlem görmemiş kontrol grubu belirlenir. Organik çözücü kullanılırsa çözücü kontrol grubu da eklenir. Her konsantrasyon grubu için 3 tekrar yapılır.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Aralık belirleme sonuçları veya bilinen toksisite verilerine göre geometrik diziyle 5 ile 7 uygulama konsantrasyonu belirlenir; işlem görmemiş kontrol ve gerekiyorsa çözücü kontrol grubu eklenir. Her grupta 4 tekrar (önceki 3 yerine), her tekrarda 10 solucan bulunmalıdır.
3.4 Kesin Test — Test Organizmalarının Hazırlanması
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Yoktur (özel bir hazırlama işlemi belirtilmemiştir).
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Test öncesinde test solucanları kesin testle aynı koşullarda 24 saat yapay toprakta tutulmalıdır. Tartılmadan önce temizce yıkanmalı ve filtre kâğıdıyla yüzeyleri kurulanmalıdır. Bu alıştırma adımı test tutarlılığını artırır.
3.5 Kesin Test — Test Maddesinin Uygulanma Yöntemi
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Cam kaba 500 g toprak konur (toprak derinliği ≥ 8 cm). Test maddesi çözeltisi eklenerek iyice karıştırılır. Organik çözücü kullanılırsa tamamen uçurulmalıdır. Toprak nemi kuru toprak ağırlığının 30%–35%'ine ayarlanır. Suda az çözünen maddeler için az miktarda organik çözücü (≤ 0.1 mL(g)/L) kullanılabilir.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Çözünürlüğe göre üç ayrı uygulama yöntemi sunar:
(1) Şu gruptaki suda çözünen test maddeleri için: test çözeltisi suyla hazırlanır ve yapay toprakla iyice karıştırılır.
(2) Şu gruptaki organik çözücüde çözünen maddeler için: n-hexane veya asetonda çözülür ve 10 g kuvars kumuna damla damla eklenir. Çözücü tamamen uçtuktan sonra önceden nemlendirilmiş yapay toprakla karıştırılır ve yaş ağırlık 750 g olana kadar deiyonize su eklenir.
(3) Şu gruptaki hem suda hem organik çözücülerde çözünmeyen maddeler için:kuvars kumuyla toplam 10 g olacak şekilde karıştırılır, ardından önceden nemlendirilmiş yapay toprakla karıştırılır ve yaş ağırlık 750 g olana kadar deiyonize su eklenir.
3.6 Kesin Test — Yapay Toprağın Ağırlığı
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Cam kaba 500 g toprak konur (toprak derinliği ≥ 8 cm).
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Cam kaba yaş ağırlığı 750 g olan işlem görmüş yapay toprak eklenir; toprak derinliği en az 8 cm olmalıdır. Belirtilen “yaş ağırlık”, önceki kuru ağırlık esaslı ölçümün yerini alır.
3.7 Kesin Test — Solucanların Vücut Ağırlığı
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Test başlangıcında bir kez tartılır; vücut ağırlığı 0.30 g ile 0.60 g arasındadır.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): İki kez tartılır: test başlangıcında (vücut ağırlığı 0.30 g ile 0.60 g) ve test sonunda hayatta kalan solucanlar için.
3.8 Kesin Test — Toprağın Nem İçeriği
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Toprak nemini kuru toprak ağırlığının 30%–35%'ine ayarlamak için deiyonize su eklenir.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Gerekirse toprak nemini kuru toprak ağırlığının yaklaşık 35%'ine ayarlamak için su eklenir. Toprağın nem içeriği NY/T 52'ye göre belirlenerek ölçüm yöntemi standartlaştırılır.
3.9 Kesin Test — İnkübasyon ve Gözlem
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Test iki hafta sürer. 7. ve 14. günlerde toprak boşaltılarak zehirlenme belirtileri ve ölü solucanlar gözlenip kaydedilir (arka uca iğneyle dokunulur; tepki yoksa ölü kabul edilir); ölüler hemen uzaklaştırılır. LC50 ve 95% güven sınırları, 7. ve 14. gün ölüm oranlarından hesaplanır.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Test süresi 14 gün olarak korunmuştur. Başlıca iyileştirmeler:
- Sürekli ışık sağlanarak solucanların yapay toprakta kalması güvence altına alınır.
- Düzenli su takviyesi tartım esas alınarak yapılır ve toprak nemi korunur.
- Gözlem yöntemi: Toprak cam kaba veya plakaya yavaşça boşaltılır; solucanlar inceleme için ayrılır.
- Ölüm ölçütü: Solucanın ön ucu mekanik uyarana tepki vermiyorsa ölü kabul edilir (arka uç ölçütünün yerini almıştır).
- 7. gün incelemesinden sonra hayatta kalan solucanlar ve yapay toprak kaba geri konarak teste devam edilir.
- Test sonunda hayatta kalan solucanlar tartılır ve yapay toprağın nem içeriği belirlenir.
4. İstatistiksel Yöntemler ve Kalite Kontrolü
2025 sürümü istatistiksel analiz çerçevesini günceller ve kalite kontrol şartlarını sıkılaştırarak daha güvenilir ve tekrarlanabilir test sonuçları sağlar.
4.1 İstatistiksel Yöntemler
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Her gözlem zamanı için LC50 ve 95% güven sınırları Spearman-Kärber, doğrusal enterpolasyon veya probit analizinin grafik yöntemiyle hesaplanabilir. Uygun toksisite verisi hesaplama yazılımı da kullanılabilir.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): LC50 ve 95% güven aralığını hesaplamak için probit veya lojistik regresyon gibi istatistiksel yöntemler seçilir (sınır testi hariç). Uygun istatistik yazılımı kullanılabilir. Geometrik oranı ≤ 2.0 olan ardışık iki konsantrasyonda ölüm oranları 0% ve 100% ise bu konsantrasyonların geometrik ortalaması LC50 olarak kullanılır. Bu, daha açık istatistik rehberliği sağlar ve sınır durumlarındaki belirsizliği giderir.
4.2 Kalite Kontrolü
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): İşlem görmemiş kontrol grubunda ölüm oranı 10%'u aşmamalıdır.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): İşlem görmemiş kontrol grubunda ve çözücü kontrol grubunda ölüm oranı 10%'u aşmamalıdır. Çözücü kontrol grubunun kalite kontrol ölçütlerine açıkça eklenmesi, çözücüyle ilişkili etkilerin uygun biçimde izlenmesini sağlar.
5. Raporlama ve Ekler
2025 standardı raporlama şartlarını önemli ölçüde geliştirir ve toksisite sınıflandırma çerçevesinin kaldırılması dâhil eklerde kayda değer değişiklikler yapar.
5.1 Test Raporu
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Temel raporlama şartları.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Rapor içeriği daha ayrıntılı ve standart hale getirilmiştir; test koşulları, ham veriler, istatistiksel yöntemler ve ek kalite parametrelerini kapsar. Bu, uluslararası GLP uygulamalarıyla uyumludur ve veri şeffaflığını artırır.
5.2 Yapay Toprağın Hazırlanması
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Ek A yapay toprağın bileşenlerini ve oranlarını veriyordu.
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Bileşen ve oranların yanı sıra yapay toprağın hazırlanma yöntemi de eklenmiştir; böylece laboratuvarlar arasında tutarlı toprak hazırlama için eksiksiz, adım adım bir protokol sunulur.
5.3 Toksisite Sınıflandırması
Eski Sürüm (GB/T 31270.15-2014): Ek B, LC50 (14d) / (mg a.i./kg kuru toprak) temelinde dört toksisite düzeyi belirtiyordu:
Aşırı toksik: LC50 ≤ 0.1
Yüksek derecede toksik: 0.1 < LC50 ≤ 1.0
Orta derecede toksik: 1.0 < LC50 ≤ 10
Az toksik: LC50 > 10
Yeni Sürüm (GB/T 31270.15-2025): Toksisite sınıflandırması eki kaldırılmıştır.
6. Özet ve Öneriler
GB/T 31270.15-2014'ten GB/T 31270.15-2025'e geçiş, toprak solucanı akut toksisite test çerçevesinin kapsamlı biçimde yenilenmesini temsil eder. Başlıca iyileştirmeler; genişletilmiş normatif atıflar, daha ayrıntılı reaktif ve ekipman özellikleri, birden fazla uygulama yöntemi içeren geliştirilmiş test işlemleri, güçlendirilmiş istatistiksel titizlik ve daha sağlam kalite kontrol ölçütleridir.
Şirketler, Çin'de pestisit ruhsatlandırması amacıyla gerçekleştirdikleri veya yaptırdıkları toprak solucanı akut toksisite testlerinde aşağıdaki adımlara öncelik vermelidir:
Test protokollerini güncelleyin — SOPs belgelerini yeni uygulama yöntemleri, toprak ağırlığı (750 g yaş ağırlık), tekrar şartları (grup başına 4) ve gözlem işlemlerine göre revize edin.
Ekipmanı geliştirin — terazilerin belirtilen okunabilirlik şartlarını (0.01 g, 0.001 g, 0.0001 g) karşıladığını doğrulayın; mevcut değilse lüksmetre ve pH metre gibi ek ekipman edinin.
Yeni istatistiksel yöntemleri benimseyin — eski Spearman-Kärber yaklaşımı yerine probit veya lojistik regresyon analizini uygulayın ve belirli ölüm örüntüleri için geometrik ortalama hesabına hazırlanın.
Rapor belgelerini geliştirin — test raporlarını ham veriler, test koşulları ve istatistiksel yöntemler dâhil yeni ve daha kapsamlı raporlama şartlarına uyarlayın.
GB/T 31270.15-2025 standardına geçişte yardıma mı ihtiyacınız var?
1 Mayıs 2026 yürürlük tarihi geçtiğinden, yöntem geçişini henüz tamamlamayan laboratuvarlar ve pestisit ruhsat sahipleri bunu en kısa sürede yapmalıdır. REACH24H'nin tarım kimyasalları uyum ekibi; yeni standarda uyum için test protokolü incelemesi, laboratuvar yeterlilik değerlendirmesi ve düzenleyici başvuru desteği sunabilir.
Uyum Sorunuzu Gönderin Çin Pestisit Hizmetini Görüntüleyin
Yazan
REACH24H Agrochemical Compliance Team
REACH24H
REACH24H tarım kimyasalları ekibi; pestisit, biyopestisit, biyosit, biyostimülan ve gübre işletmelerine tek noktadan küresel mevzuat uyum hizmetleri sunar. Çin, ABD, Avrupa, Asya-Pasifik ve Latin Amerika dahil pazarlarda dünya çapında 600'den fazla işletmeye hizmet verdik. Çin'in en büyük 100 pestisit işletmesinde kapsama oranımız 90% üzerindedir.